assaygenie HUFI07676说明书
货号：
HUFI07676
该测定法的Genie人类过氧化氢酶ELISA试剂盒可以在下列样品中测定人类过氧化氢酶：血清，血液，血浆，细胞培养上清液和其他相关的上清液和组织。
我们的人过氧化氢酶 ELISA 试剂盒如何工作？
Assay Genie（酶联免疫吸附测定）测定试剂盒设计用于定量测量各种样品中的分析物。由于当今的科学家需要高影响力期刊的高质量一致数据，因此 Assay Genie 开发了我们灵敏、快速和可靠的 ELISA 试剂盒检测系列，以满足并超越这些需求。我们的检测试剂盒使用定量夹心 ELISA 技术，每个试剂盒都带有预包被在 96 孔微量滴定板上的高度特异性抗体。
在 Assay Genie，我们了解对速度的需求！因此，我们开发了一种超快速方案，这意味着您可以快速获得结果。因此，一旦您准备好并铺板了样品、空白和标准品，您只需使用高度特异性的生物素偶联一抗和偶联辣根过氧化物酶 (HRP) 的亲和素进行孵育，然后孵育适当的时间。根据协议洗涤板并添加 TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）溶液后，由于 HRP 催化的酶促反应，应检测到蓝色的出现。下一步是添加终止溶液，终止 HRP 反应，蓝色变为黄色，信号强度在 450nm 读板器上测量。
| 产品代码 | HUFI07676 | ||||||||||||||||
| 别名 | CAT ELISA 试剂盒、Cas1 ELISA 试剂盒、Cs-1 ELISA 试剂盒、过氧化氢酶 ELISA 试剂盒 | ||||||||||||||||
| 检测方法 | 夹心ELISA，双抗体 | ||||||||||||||||
| 应用 | 该免疫测定试剂盒允许体外定量测定血清血浆和其他生物体液中的人 CAT（过氧化氢酶）浓度。 | ||||||||||||||||
| 尺寸 | 96T | ||||||||||||||||
| 范围 | 15.625-1000pg/ml | ||||||||||||||||
| 灵敏度 | < 9.375pg/ml | ||||||||||||||||
| 贮存 | 4'C 6 个月 | ||||||||||||||||
| 恢复 | 下面列出的基质中加入了一定水平的人 CAT（过氧化氢酶），通过将测量值与样品中人 CAT（过氧化氢酶）的预期量进行比较来计算回收率。
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| 线性度 | 该试剂盒的线性通过测试添加适当浓度的人 CAT（过氧化氢酶）及其系列稀释液的样品进行测定。结果通过计算浓度与预期浓度的百分比来证明。
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| 简历（％） | 批内：CV<8% | ||||||||||||||||
| 笔记 | 仅供研究使用 |
以下方案是使用生物素化检测抗体和链霉亲和素-HRP 的人 CAT（过氧化氢酶）ELISA 试剂盒的示例方案。夹心 ELISA 试剂盒允许通过使用已知分析物浓度作为标准并绘制已知浓度与已知标准浓度的吸光度来检测和量化样品中的分析物。这使研究人员可以计算样品中存在的人类 CAT（过氧化氢酶）抗体的数量。
在加入孔之前，在 37°C 下平衡 SABC 工作溶液和 TMB 底物至少 30 分钟。稀释样品和试剂时，必须*混合均匀。建议为每个测试绘制标准曲线。
| 1. | 在预涂板上分别设置标准、测试样品和控制（零）孔，然后记录它们的位置。建议重复测量每个标准和样品。在添加标准、样品和对照（零）孔之前洗板 2 次！ |
| 2. | 将 0.1ml 标准溶液分装到标准孔中。 |
| 3. | 将 0.1 ml 样品/标准稀释缓冲液加入对照（零）孔中。 |
| 4. | 将 0.1 ml 适当稀释的样品（人血清、血浆、组织匀浆和其他生物体液）加入测试样品孔中。 |
| 5. | 用盖子密封板并在 37°C 下孵育 90 分钟。 |
| 6. | 取下盖子并丢弃板内容物，将板拍在吸水滤纸或其他吸水材料上。任何时候都不要让孔*干燥。洗板 X2。 |
| 7. | 向上述孔（标准孔、测试样品孔和零孔）中加入 0.1 ml 生物素检测抗体工作液。在不接触侧壁的情况下在每个孔的底部添加溶液。 |
| 8. | 用盖子密封板并在 37°C 下孵育 60 分钟。 |
| 9. | 取下盖子，用洗涤缓冲液洗涤板 3 次。让洗涤缓冲液在每次洗涤之间在井中休息 1 分钟。 |
| 10. | 每孔加入 0.1 ml SABC 工作液，盖上板，37°C 孵育 30 分钟。 |
| 11. | 取下盖子，用洗涤缓冲液洗板 5 次，每次让洗涤缓冲液在孔中停留 1-2 分钟。 |
| 12. | 向每个孔中加入 90 µl TMB 底物，盖上板并在 37°C 下避光孵育 10-20 分钟。（注：此孵育时间仅供参考，最佳时间由最终用户决定。）在前 3-4 孔（标准溶液浓度最高）中可以看到蓝色阴影，其他孔显示没有明显的颜色。 |
| 13. | 在每个孔中加入 50 µl 停止溶液并充分混合。颜色立即变为黄色。 |
| 14. | 添加终止溶液后，立即在酶标仪中读取 450 nm 处的 OD 吸光度。 |
人 CAT（过氧化氢酶）ELISA 试剂盒组件 | 96 检测 | 贮存 |
| ELISA 微孔板（可拆卸） | 8×12 条 | 4°C 6 个月 |
| 冻干标准品 | 2 | 4°C/-20°C |
| 样品/标准稀释缓冲液 | 20毫升 | 4°C |
| 生物素标记抗体（浓缩） | 120ul | 4°C（避光） |
| 抗体稀释缓冲液 | 10毫升 | 4°C |
| HRP-链霉亲和素偶联物(SABC) | 120ul | 4°C（避光） |
| SABC 稀释缓冲液 | 10毫升 | 4°C |
| TMB底物 | 10毫升 | 4°C（避光） |
| 停止解决方案 | 10毫升 | 4°C |
| 洗涤缓冲液（25X） | 30毫升 | 4°C |
| 封板机 | 5 | —— |
Assay Genie Human CAT（过氧化氢酶）ELISA 试剂盒需要其他设备和材料来进行检测。请参阅下面的列表了解更多详情。
带 450 nm 波长滤光片的酶标仪
多通道移液器、移液器、微量离心管和一次性移液器吸头
孵化器
去离子水或蒸馏水
吸水纸
缓冲水库
在进行 ELISA 检测时，重要的是准备您的样品以达到可能的最佳结果。下面我们列出了为不同样品类型准备样品的程序。
| 样品类型 | 协议 |
血清 | 如果使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 分钟。以 1,000x g 离心 10 分钟。立即收集血清部分并进行检测或等分并将样品储存在 -80°C。避免多次冻融循环。 如果不使用血清分离管，让样品在 2-8°C 下凝结过夜。以 1,000x g 离心 10 分钟。立即取出血清并进行检测，或将样品等分并储存在 -80°C 下。避免多次冻融循环。 |
等离子体 | 使用 EDTA 或肝素作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 分钟内，将样品在 4°C 下以 1000 × g 离心 15 分钟。立即收集血浆部分并进行检测或等分并将样品储存在 -80°C。避免多次冻融循环。注意：过度溶血的样品不适合与该试剂盒一起使用。 |
尿液和脑脊液 | 在无菌容器中收集尿液（中流），以 2000-3000 rpm 离心 20 分钟。立即取出上清液并进行检测。如果检测到任何沉淀，请重复离心步骤。类似的协议可用于脑脊液。 |
细胞培养上清 | 用移液管收集细胞培养基，然后在 4°C 下以 1500 rpm 离心 20 分钟。立即收集澄清的上清液并进行检测。 |
细胞裂解液 | 在裂解缓冲液中溶解细胞，并在冰上静置 30 分钟。以 14,000 xg 离心管 5 分钟以去除不溶性物质。将上清液分装到新管中并丢弃剩余的全细胞提取物。使用总蛋白质测定法量化总蛋白质浓度。立即测定或分装并储存在 ≤ -20 °C。 |
组织匀浆 | 组织匀浆的制备将因组织类型而异。用 1X PBS 冲洗组织以去除多余的血液并在 20ml 1X PBS（包括蛋白酶抑制剂）中匀浆，并在 ≤ -20°C 下储存过夜。打破细胞膜需要两个冻融循环。为了进一步破坏细胞膜，您可以对样品进行超声处理。以 5000xg 离心匀浆 5 分钟。立即取出上清液并进行检测，或等分并储存在 -20°C 或 -80°C。 |
组织裂解物 | 用 PBS 冲洗组织，切成 1-2 毫米的碎片，并用 PBS 中的组织匀浆器匀浆。加入等体积的含有蛋白酶抑制剂的 RIPA 缓冲液，并在室温下轻轻搅拌裂解组织 30 分钟。离心去除碎屑。使用总蛋白质测定法量化总蛋白质浓度。立即测定或分装并储存在 ≤ -20 °C。 |
母乳 | 收集牛奶样品并在 4°C 下以 10,000 xg 离心 60 分钟。分装上清液并进行测定。如需长期使用，请将样品储存在 -80°C。尽量减少冷冻/解冻周期。 |
| UniProt 蛋白质功能： | 过氧化氢酶：几乎存在于所有有氧呼吸的生物体中，用于保护细胞免受过氧化氢的毒性作用。促进细胞的生长，包括 T 细胞、B 细胞、髓系白血病细胞、黑色素瘤细胞、肥大细胞瘤细胞以及正常和转化的成纤维细胞。同源四聚体。属于过氧化氢酶家族。 |
| UniProt 蛋白质详细信息： | 蛋白质类型：氨基酸代谢 - 色氨酸；内质网; EC 1.11.1.6；细胞凋亡；能量代谢 - 甲烷；线粒体; 水解酶；氧化还原酶 人类直系同源物的染色体位置： 11p13 细胞成分：过氧化物酶体膜；高尔基体; 过氧化物酶体基质；粘着斑；细胞内膜结合细胞器；膜; 内质网；溶酶体；质膜; 线粒体膜间隙；过氧化物酶体；胞质溶胶 分子功能：抗氧化活性；氧化还原酶活性，作用于作为受体的过氧化物；酶结合；蛋白质同二聚化活性；过氧化氢酶活性；金属离子结合；血红素结合；NADP 绑定；氨酰化酶活性；受体结合 生物过程：胆固醇代谢过程；血红蛋白代谢过程；核碱基、核苷和核苷酸代谢过程；嘌呤碱代谢过程；NF-κB 转录因子的激活；蛋白质同源四聚化；成骨细胞分化；正调控磷酸肌醇 3-激酶级联反应；对维生素 E 的反应；对活性氧的反应；三酰甘油代谢过程；对高氧的反应；紫外线防护；过氧化氢分解代谢过程；抑制 NF-κB 转录因子；输尿管芽发育；细胞分裂的正调控；对缺氧的反应；有氧呼吸; 嘌呤核苷酸分解代谢过程；蛋白质四聚化；细胞凋亡的负调控；老化 疾病：急性贫血 |
| NCBI总结： | 该基因编码过氧化氢酶，这是人体抵御氧化应激的关键抗氧化酶。过氧化氢酶是一种血红素酶，存在于几乎所有需氧细胞的过氧化物酶体中。过氧化氢酶将活性氧类过氧化氢转化为水和氧气，从而减轻过氧化氢的毒性作用。假设氧化应激在许多慢性或迟发性疾病的发展中起作用，例如糖尿病、哮喘、阿尔茨海默病、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和癌症。该基因的多态性与过氧化氢酶活性降低有关，但迄今为止，无过氧化氢血症是已知由该基因引起的疾病。[由 RefSeq 提供，2009 年 10 月] |
| UniProt 代码： | P04040 |
| NCBI GenInfo 标识符： | 115702 |
| NCBI 基因 ID： | 847 |
| NCBI 加入： | P04040.3 |
| UniProt 相关加入： | P04040 |
| 分子量： | |
| NCBI 全名： | 过氧化氢酶 |
| NCBI 同义词全名： | 过氧化氢酶 |
| NCBI *符号： | 猫 |
| NCBI 蛋白质信息： | 过氧化氢酶 |
| UniProt 蛋白名称： | 过氧化氢酶 |
| 蛋白质家族： | 过氧化氢酶 |
| UniProt 基因名称： | 猫 |
| UniProt 条目名称： | CATA_HUMAN |
