bmgrp BI-VAN1MR说明书
Vanin-1 ELISA Kit (Mouse/Rat VNN1) | BI-VAN1MR
Biomedica大鼠和小鼠Vanin1 ELISA试剂盒：
分析特征
方法
夹心ELISA，HRP / TMB，12×8孔可分离试纸
样品类型
血清，血浆和尿液
样品量
5微升/孔
测定时间
4小时/ 30分钟
灵敏度
2.31 pmol /升
标准范围
0 – 200 pmol / l（= 0 – 10.6 ng / ml）
转换系数
1 pmol / l = 52.07 pg / ml（MW：52.07 kDa）
中间运行（n = 5）：≤8％CV
批量分析（n = 7）：≤8％CV
特异性
内源和重组小鼠/大鼠Vanin-1。
采用
仅供研究使用。
验证数据
请参阅验证数据选项卡，以了解：精度，准确性，稀释线性，样品值
Vanin-1 ELISA试剂盒是一个4.5小时的96孔夹心ELISA，用于定量测定血清，血浆和尿液中的Vanin-1。
Vanin-1小鼠/大鼠ELISA试剂盒是一种夹心酶免疫测定法，用于定量测定小鼠或大鼠样品中的Vanin-1。该试剂盒利用重组小鼠Vanin-1作为校准物。VNN1基因在黑猩猩，恒河猴，狗，牛，小鼠，大鼠和鸡中是保守的https://www.ncbi.nlm.nih.gov/homologene/32130。
下图说明了Vanin-1夹心ELISA的原理：
靶抗原： 小鼠/大鼠Vanin-1
靶抗原：重组小鼠Vanin-1
一步，将测定缓冲液吸移到微量滴定条的孔中。此后，将标准/对照/样品和检测抗体（多克隆绵羊抗小鼠Vanin-1-HRPO）移入孔中，并预先涂有抗小鼠Vanin-1抗体。存在于标准品/对照品/样品中的Vanin-1与孔中预包被的抗体结合，并与检测抗体形成三明治。在洗涤步骤中，将除去所有非特异性未结合的材料。在下一步中，将底物（TMB，四甲基联苯胺）移入孔中。底物的酶催化颜色变化与样品中Vanin-1的量成正比。使用标准酶标仪可以检测到这种颜色变化。吸光度的剂量响应曲线（光密度，使用从标准品获得的值，生成相对于标准品浓度的450 nm处的OD。直接从剂量响应曲线确定样品中Vanin-1的浓度。
下图显示了Mouse Vanin-1 ELISA和Rat Vanin-1 ELISA的典型标准曲线。Vanin ELISA试剂盒针对重组小鼠Vanin-1肽进行了校准：
内容 | 描述 | 数量 |
盘子 | 装在带干燥剂的铝袋中的带固定器中的抗小鼠Vanin-1抗体预包被的微量滴定条 | 12 x 8测试 |
洗车场 | 洗涤浓缩液20倍 | 1 x 50毫升 |
性病 | 包含重组Mouse Vanin-1（冻干）的储备标准液（200 pmol / l） | 1个小瓶 |
CTRL键 | 对照，冻干，浓度见标签 | 1个小瓶 |
ASYBUF | 测定缓冲液，准备使用 | 1 x 7毫升 |
康杰 | 共轭多克隆绵羊抗小鼠Vanin-1抗体-HRP | 1 x 6毫升 |
潜艇 | 基材（TMB解决方案），可以立即使用 | 1 x 13毫升 |
停 | 停止解决方案，准备使用 | 1 x 7毫升 |
储存说明： Vanin-1 Mouse / Rat ELISA试剂盒中的所有试剂在4°C稳定，直到每种试剂标签上注明的有效期。
血清，血浆和尿液样本适用于此Vanin-1 ELISA分析。研究期间请勿更改样品类型。我们建议对所有样品，标准品和质控品进行重复测量。列出的所列样品收集和储存条件旨在作为一般准则。
使用EDTA，肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂，在标准化血清分离管（SST）或标准化血液采集管中收集静脉血样。对于血清样品，让样品在室温下凝结30分钟。根据试管制造商的使用说明离心分离。立即测定采集的样品，或等分试样并保存在-25°C或更低的温度下。脂血或溶血的样品可能会产生错误的结果。样品至少要经历4次冻融循环。
无菌收集当天的一批尿（中游），直接排入无菌容器中。离心除去颗粒物，立即分析或等分并保存在-25°C或更低的温度下。样品可以经历至少四个冻融循环。
1。 | 使WASHBUF浓缩液达到室温。缓冲液浓缩物中的晶体在室温下会溶解。 |
2。 | 将WASHBUF浓缩液按1:20的比例稀释，例如50 ml WASHBUF + 950 ml蒸馏水或去离子水。进行测定时仅使用稀释的WASHBUF。 |
稀释的WASHBUF在4°C（2-8°C）下可以稳定长达一个月。
1。 | 移取200 µl蒸馏水或去离子水到储备标准液（STOCK STD）和对照（CTRL）小瓶中。准确的浓度印在每个样品瓶的标签上。 |
2。 | 在室温（18-26°C）下放置10分钟。轻轻涡旋。 |
重构的STD和CTRL在室温（18-26°C）下稳定三个小时。STD和CTRL在标签上注明的失效日期之前可稳定在-25°C或更低的温度，并且多可进行三个冻融循环。
1。 | 使用聚丙烯管，并将它们标记为STD6至STD1，如下所示（图1）。 |
2。 | 将STOCK STD标记为STD7。 |
3。 | 吸取50 µl ASYBUF（测定缓冲液）到每个标有STD6至STD1的管中。 |
4。 | 准备两倍的系列稀释液以获得STD6至STD2。用移液管吸取50 µl重新配制的STOCK STD = STD7到标有STD6的管中。*混合。继续对STD5，STD4，STD3，STD2进行系列稀释（见图1）。 |
5， | ASYBUF用作零标准品（= STD1，0 pmol / l）。 |
准备STD7至STD1
将样品置于室温并轻轻混合样品，以确保样品均匀。我们建议对所有样品进行重复测量。
值高于STD7（200 pmol / l）的样品可用ASYBUF（测定缓冲液）稀释。
鼠标样本
小鼠血清，血浆和尿液样品必须用分析缓冲液（ASYBUF）稀释1 + 7。5 µl样品+ 35 µl ASYBUF。稀释后的样品在4°C（2-8°C）下稳定过夜。因此可以在分析前一天制备稀释液。
大鼠样本
大鼠样品未经稀释即使用。
在开始测定之前，请阅读整个方案。
1。 | 使样品和试剂达到室温（18-26°C）。 |
2。 | 在协议表上标记STD / CTRL / SAMPLE（标准/对照/样品）的位置。 |
3。 | 从铝袋中取出微量滴定条。将未使用的干燥剂带在4°C的铝袋中存放。胶条在标签上标明的有效期限之前都是稳定的。 |
4。 | 移取50 µl ASYBUF（测定缓冲液，天然盖）到每个孔中。 |
5， | 将5 µl STD / CTRL / SAMPLE加到各自的孔中，一式两份。 |
6。 | 在每个孔中加入50 µl CONJ（结合物，琥珀色帽）。轻轻旋转。 |
7。 | 盖紧板，轻轻旋转并在室温（18-24°C）下孵育4小时。 |
8。 | 用300 µl稀释的WASHBUF（洗涤缓冲液）抽吸并洗孔5次。后一次洗涤后，用一块毛巾强力拍打盘子，以除去剩余的WASHBUF。 |
12 | 在每个孔中加入100 µl SUB（底物，蓝色盖）。 |
13 | 在黑暗中于室温下孵育30分钟。 |
14。 | 在每个孔中加入50 µl STOP（终止溶液，白色盖）。 |
15 | 如果可用，立即在参考630 nm的450 nm处测量吸光度。 |
使用450 nm波长（参考波长630 nm）在读板器上读取所有孔的光密度（OD）。使用能够生成四参数对数（4-PL）拟合的市售软件从标准品的吸光度读数构建标准曲线。或者，将标样在x轴上的浓度相对于每种标样在y轴上的平均吸光度作图，并通过图中的点绘制拟合曲线。除4-PL以外的曲线拟合算法尚未得到验证，用户需要对其进行评估。
从标准曲线获得样品浓度。如果需要，可通过应用转换因子将pmol / l转换为pg / ml（1 ng / ml = 18.87 pmol / l； Vanin-1小鼠/大鼠MW：53 kDa）。
计算样品的终浓度时，必须考虑各自的稀释系数。
Vanin-1是由513个氨基酸组成的GPI固定糖蛋白，由一个碱基结构域和一个酶促腈水解酶结构域组成（Boersma等，2014）。外切酶催化泛酸水解为泛酸（维生素B5）和胞嘧啶，因此参与氧化应激和炎症的调节（Maras等，1999）。Vanin-1具有广泛的组织表达，在肾小管上皮细胞中观察到高水平（Pitari等人，2000）.Vanin-1的GPI锚可以通过未知的机制裂解，从而导致Vanin-1被掉进细胞外空间。
分子量 | 52.07 kDa |
细胞定位 | 细胞外质膜 |
翻译后修饰 | 糖基化，脂化（GPI锚） |
序列相似性 | Vanin蛋白家族的成员，与生物素酶家族的序列相似性 |
替代名称 | 血管非炎性分子1，Tiff66，泛酸水解酶，泛酸酶，VNN1，HDLCQ8 |
Entrez / NCBI ID | 8876 |
基因卡 | GC06M132680 |
OMIM | 603570 |
蛋白质图谱 | VNN1 |
Uniprot ID | O95497 |
Vanin-1是一种上皮细胞外酶，可激活泛素向泛酸（维生素B5）和半胱胺的转化（Pitari等，2000）。已有研究表明Vanin-1释放的半胱胺可通过抑制超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）等抗氧化剂的活性来促进氧化性组织损伤和炎症（Hosohata等，2011; Saghaei等，2012 ）。实际上，Vanin-1基因敲除小鼠的GSH储存量较高，并且对全身伽马射线辐射引起的氧化损伤具有更高的抵抗力（Berruyer等，2004）。另一方面，一些报告表明Vanin-1也可能充当氧化应激的组织传感器。在小鼠中，可以在Vanin-1的启动子区域鉴定出类似抗氧化剂反应的元素，它们在存在氧化应激的情况下增强Vanin-1的表达（Berruyer等，2004）。同样，在人类近端肾小管细胞系中，暴露于有机溶剂后，Vanin-1的表达也被上调（Hosohata等，2011）。在大鼠肾脏缺血-再灌注后，还发现了一个涉及氧化组织损伤的模型，肾脏Vanin-1的表达也被上调（Yoshida等，2002）。
Vanin-1表达的高水平可能归因于肾小管上皮细胞，而肾小球中没有检测到表达（Hosohata等，2011； Pitari等，2000）。因此，从肾细胞释放的Vanin-1可以在尿液中检测到。在一项旨在鉴定肾小管损伤的生物标记物的研究中，Hosohata及其同事确实可以在肾毒性药物诱发的大鼠模型中证明，Vanin-1在肾小管中的表达要比其他标记物早，并掉入尿液中（Hosohata等， 2011）。随后的研究进一步证实了Vanin-1作为药物引起的急性肾损伤（Hosohata等，2012，2016a），阻塞性肾病（Washino等，2019）和肾积水（Hosohata）的早期肾小管损伤的生物标志物的有效性。等（2018），糖尿病肾病（Fugmann等，2011），高盐摄入下实验性结肠炎（Hosohata等，2014）和自发性高血压大鼠的肾脏损伤（Hosohata等，2016b; Washino等，2018）。值得注意的是，Vanin-1似乎比已建立的标志物KIM-1，NGAL或NAG具有更好的预测急性肾损伤的价值（Fugmann等，2011； Hosohata，2016； Hosohata等，2011）。
肾脏科
Vanin-1-/-小鼠表现出谷胱甘肽介导的组织对氧化应激的抗性。
Berruyer，C.，Martin，FM，Castellano，R.，Macone，A.，Malergue，F.，Garrido-Urbani，S.，Millet，V.，Imbert，J.，Duprè，S.，Pitari，G. ，Naquet，P.，Galland，F.，2004 。细胞。生物学 24，7214–7224。
PMID：15282320; PMCID：PMC479710
Vanin 1的结构：连接代谢疾病和炎症的关键酶。
Boersma，YL，Newman，J.，Adams，TE，Cowieson，N.，Krippner，G.，Bozaoglu，K.，Peat，TS，2014。ActaCrystallogr 。D生物学。Crystallogr。70，3320–3329。
PMID：25478849
在1型糖尿病肾病大鼠模型中，vanin-1的蛋白质组学鉴定为肾脏损伤的标志物。
Fugmann，T.，Borgia，B.，Révész，C.，Godó，M.，Forsblom，C.，Hamar，P.，Holthöfer，H.，Neri，D.，Roesli，C.，2011.肾脏。80，272–281。
PMID：21544065
肾盂尿液中的Vanin-1反映了肾积水大鼠模型的肾脏损伤。
Hosohata，K.，Jin，D.，Takai，S.，Iwanaga，K.，2018.分子科学19。
PMID：30332759; PMCID：PMC6214032
氧化应激在药物诱发的肾损伤中的作用。
Hosohata，K.，2016年。分子科学17。
PMID：27809280; PMCID：PMC5133827
尿vanin-1对尿路上皮癌患者顺铂诱导的肾毒性的早期预测。
Hosohata，K.，Washino，S.，Kubo，T.，Natsui，S.，Fujisaki，A.，Kurokawa，S.，Ando，H.Fujimura，A.，Morita，T.，2016a。毒理学359–360，71–75。
PMID：27317936
高盐摄入量的自发性高血压大鼠小管损伤的早期尿液生物标志物。
Hosohata，K.，Yoshioka，D.，Tanaka，A.，Ando，H.，Fujimura，A.，2016年b。高血压。Res。39，19–26。
PMID：26376947
实验性结肠炎大鼠中使用尿vanin-1早期发现肾脏损伤。
Hosohata，K.，Ando，H.，Fujimura，A.，2014。《应用毒理学杂志》 34，184–190 。
PMID：23307618
尿Vanin-1作为药物诱导的急性肾损伤的早期检测的新型生物标志物。
Hosohata，K.，Ando，H.，Fujimura，A.，2012年。《药理学与实验治疗学杂志》 341，656–662。
Vanin-1：肾毒性剂引起的肾损伤的潜在生物标志物。
Hosohata，K.，Ando，H.，藤原，Y。，藤村，A.，2011。毒理学290，82–88。
PMID：21907259
Pantetheinase是小鼠和人类vanin-1蛋白的真实身份吗？
Maras，B.，Barra，D.，Duprè，S.，Pitari，G. ，1999。FEBS来信461，149-152。
膜结合Vanin-1的Pantetheinase活性：Vanin-1缺陷小鼠组织中缺乏游离半胱胺。
Pitari，G.，Malergue，F.，Martin，F.，Philippe，JM，Massucci，MT，Chabret，C.，Maras，B.，Duprè，S.，Naquet，P.，Galland，F.，2000。FEBS信函483，149–154。
卡托普利对半胱胺诱导的十二指肠溃疡的影响。
Saghaei，F.，Karimi，I.，Jouyban，A.，Samini，M.，2012。实验。Pathol。64，373–377。
PMID：21036019
Vanin-1，急性肾损伤的新型生物标志物，用于阻塞性肾病：一项前瞻性队列研究。
华盛顿州北区野市，细田ata市，大岛县，小河内市，小西区，中村市，佐藤市，宫川市，2019年。分子科学20。
PMID：30791405; PMCID：PMC6412925
正常血压大鼠高盐摄入量引起的肾小管损害的早期尿液生物标志物。
Washino，S.，Hosohata，K.，Jin，D.，Takai，S.，Miyagawa，T.，2018.临床。经验 Pharmacol。生理学。45，261–268。
PMID：29027259
监测大鼠肾脏缺血再灌注中基因表达的变化。
吉田T.，库雷拉M.，比托F.，Min H.，Ingelfinger，JR，Stears，RL，Swinford，RD，Gullans，SR，Tang，S.-S.，2002年。61，1646–1654.。
PMID：11967014
