agilent PB31 RPE 和 PB32 RPE的区别 藻胆蛋白常见问题解答 (FAQ)
我想在活化或无菌过滤等操作之前对 PB20 APC 的 60% 硫酸铵悬浮液进行脱盐。我可以将悬浮液稀释后用离心柱脱盐吗？
我们不建议使用离心脱盐柱，因为它们的分离度不足以*去除铵离子。我们建议采用以下任意选项进行脱盐： 1. 在 PBS 或您选择的缓冲液中透析 APC（每天至少更换几次缓冲液，以确保铵离子*交换）。可以使用标准透析管、商用透析盒，完整 APC 的分子量约为 100 kDa。 2. 使用 GE 公司的 PD-10 柱等色谱柱进行脱盐。在这种情况下，在装载至色谱柱之前 APC 应进行离心（和丢弃无色上清液），沉淀团块应*复溶于 PBS（或您选择的缓冲液）中。如果时间是考察因素之一，此步骤也可用于快速启动上面的透析选项。为了确保脱盐*，建议样品体积不要超过柱床体积的 10%。
我有一款购自 Turner Designs 的荧光计，专门用于以 PB11 C-藻蓝蛋白作为校准标样的应用。安捷伦有相关校准方案吗？
我们没有使用 PB11 进行仪器校准的特定方案，但 Turner Designs 公司应该能够为您提供帮助。不过，我们可以为您提供一些操作建议。我们建议您仅从样品瓶中取用您所需量的样品，其余未稀释的部分在 4 °C 下避光储存于原硫酸铵制剂缓冲液中。虽然 PB11 可以在水中稀释，但这并不是良好的储存方式。 PB11 经水或 PBS 稀释后不太稳定，因此每次只能稀释一次校准所需的量，即每次校准都应使用新鲜配制的 PB11 稀释液。因为稀释液将由新鲜物料制成，所以可以使用水。由于 PB11 的浓度很小，因此在稀释前无需为去除硫酸铵对物料进行透析。需要重点注意的是，在将任何物料从原装容器中移出并进行稀释之前，必须充分混合 Pb11。我们的 PB11 的浓度规格为 ≥ 10 mg/mL，但通常我们供应的浓度更高。浓度值列在分析证书上。
安捷伦有关于 PB40-PerCP 与抗体或其他蛋白质偶联的方案吗？
PB40-PerCP 可以与蛋白质偶联，但必须用 SMCC 进行活化。缓冲液将 PerCP 交换到 PBS 中，并用 NHS-SMCC 活化（比例可能需要优化）。由于活化 PerCP 的保质期很短，我们建议您只活化您所需量的偶联物料。因此，我们不提供 PerCP 偶联试剂盒，或像 RPE 和 APC 一样将活化的 PerCP 作为独立产品提供。抗体偶联的一个合理起点为 1 mg SMCC 活化的 PerCP:1 mg Ab，但这需要针对您的特定目标进行优化。对于一般的偶联方案，我们的 PJ31K RPE 偶联试剂盒对所用的步骤和试剂进行了详细介绍。一些单克隆抗体可能在 DTT 还原后沉淀，例如 PJ31K 方案。使用 SPDP/TCEP 的替代方案可能适用于在 DTT 中表现不佳的抗体，我们的替代偶联方案技术简报中提供了相关信息。
安捷伦网站以往的产品 PB31 RPE 和 PB32 RPE+ 有什么区别？
PB32 与 PB31 是由相同的类紫菜藻菌株产生的，但前者经过额外的纯化步骤去除游离的 RPE 亚基。我们认为 PB32 是一种合适的 PB31 替代物，在偶联应用中可能提供更好的结果。但是，如果您更倾向于使用 PB31，
如何测量 RPE 的浓度？
如何测量 RPE 的浓度？
我们在 566 nm 处测量 RPE 的浓度。将 λmax (566 nm) 处的吸光度乘以 10，再除以消光系数 (82)，得到 RPE 的浓度 (mg/mL)。 RPE 浓度 (mg/mL) = （A566 测量值 × 10）/82 我们将 λmax 处的消光系数作为 E1%，即 1% 溶液 (10 mg/mL) 在 1 cm 光程的比色皿中的吸光度。然而，许多我想在活化或无菌过滤等操作之前对 PB20 APC 的 60% 硫酸铵悬浮液进行脱盐。我可以将悬浮液稀释后用离心柱脱盐吗？我有一款购自 Turner Designs 的荧光计，专门用于以 PB11 C-藻蓝蛋白作为校准标样的应用。安捷伦有相关校准方案吗？安捷伦有关于 PB40-PerCP 与抗体或其他蛋白质偶联的方案吗？安捷伦网站以往的产品 PB31 RPE 和 PB32 RPE+ 有什么区别？如何测量 RPE 的浓度？科学家已经习惯于观察 1 mg/mL (0.1%) 蛋白质的消光系数。对于 RPE，即为 1 mg/mL 溶液的 A566 吸光度值 8.2，它的计算公式更为简单： RPE 浓度 (mg/mL) = A566 测量值/8.2 我们用分光光度法而不是荧光法测量浓度。有关计算藻胆蛋白浓度和摩尔浓度的更多信息，请参阅安捷伦偶联评估技术简报。
我想在活化或无菌过滤等操作之前对 PB32 RPE 的 60% 硫酸铵悬浮液进行脱盐。我可以将悬浮液稀释后用离心柱脱盐吗？
我们不建议使用离心脱盐柱，因为它们的分离度不足以*去除铵离子。我们建议采用以下任意选项进行脱盐： 1. 在 PBS 或您选择的缓冲液中透析 RPE（每天至少更换几次缓冲液，以确保铵离子*交换）。可以使用标准透析管、商用透析盒，完整 RPE 的分子量约为 240 kDa。 2. 使用 GE 公司的 PD-10 柱等色谱柱进行脱盐。在这种情况下，在装载至色谱柱之前 RPE 应进行离心（和丢弃无色上清液），沉淀团块应*复溶于 PBS（或您选择的缓冲液）中。如果时间是考察因素之一，此步骤也可用于快速启动上面的透析选项。为了确保脱盐*，建议样品体积不要超过柱床体积的 10%。
