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不再需要DNA分离
-Direct Oral Swab 2x PCR Master Mix使您可以直接进行PCR,而无需任何先前的DNA提取步骤中的繁琐步骤。只需直接从唾液或颊拭子样本中进行基因分型或病原体检测测定即可。
Direct Oral Swab 2x PCR Master Mix包含HiDi Taq DNA聚合酶,因此,它在需要高单核苷酸区分性的所有分析中也很熟练,例如在PCR等位基因特异性扩增(ASA)中。HiDi Taq DNA聚合酶可从3'末端匹配的引物有效扩增,并区分错配的引物。
该试剂盒配有优化的缓冲液系统和用于唾液样品的单独裂解缓冲液。
应用领域:
-直接从唾液样本中进行PCR-直接从唾液样本中进行
病原体检测
-基因分型和基因组分析
-通过等位基因特异性扩增(ASA)/等位基因特异性PCR进行SNP检测-直接从唾液样本中进行
-HLA基因分型
-终点PCR-
真实使用基于荧光的水解探针
进行实时PCR 当添加合适的实时染料(例如GreenDye(#2000)或荧光探针)时,所有HiDi产品也都适用于实时循环。
Direct Oral Swab 2xPCR Master Mix也可以作为5'-3'核酸酶用于水解型探针(例如TaqMan)。
我们建议设计具有较短扩增子长度(约60-200 bp)的引物,以获得良结果,但也可以使用更长的扩增子长度。如果更长的扩增子> 500 bp,可能需要添加额外的氯化镁(+ 0.5-1.5 mM)。
PCR活性:测试直接口服拭子2x PCR Master Mix的成功等位基因特异性PCR性能,检测唾液样品中人基因组DNA中的基因组SNP(rs72921001)。随后在2.5%琼脂糖凝胶上分析PCR产物。通过在匹配的引物的右侧扩增子长度为109 bp的溴化乙锭染色中观察到特定产物。在错配引物的情况下,在40个循环后没有可见的产物形成。
DNA聚合酶活性:已使用人工DNA模板和DNA引物对HiDiTaq DNA聚合酶活性进行了监测,并将其调整为特定的DNA聚合酶活性。
酶浓度已通过蛋白质特异性染色确定。请通过[email protected]查询有关特定批次浓度的更多信息。
在标准测试反应中未检测到污染。
匹配与错配核苷酸位于引物的3'末端,以获得宜区分结果。
香菜:有些人喜欢食物,有些则讨厌。在这里,我们正在检测HeLa基因组DNA中的基因组SNP(rs72921001)。据报道,该SNP接近许多编码嗅觉受体的基因。(参考:Eriksson N. 等人(2012年),“嗅觉受体基因附近的遗传变异会影响香菜的偏好。”)
考虑到仅C等位基因特异性引物被延伸并在特定扩增子中产生,我们可以得出不喜欢香菜的遗传易感性,因为该SNP与检测香菜的肥皂味显着相关。
在实时染料存在下,从1 ng / µl HeLa gDNA中进行等位基因特异性PCR,表明仅扩增了C等位基因特异性引物。区分了A等位基因特异性引物,因此多50个循环都不能扩增。
随后在2.5%琼脂糖凝胶上分析PCR产物。通过溴化乙锭染色以109 bp的扩增子长度观察特定的产物。