PolyPlus-transfection(PT)是一家位于法国的生物技术公司,目前已经通过了ISO9001:2000质量体系认证。该公司拥有十几年的的转染试剂研发经验,已经开发了一系列的转染试剂,如:基因的体内和体外转染试剂、寡核苷酸转染试剂和siRNA转染试剂等,可以根据不同的需要获得稳定或瞬时的转染效果
试剂 | FectoPRO ® |
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分子交付 | 脱氧核糖核酸 |
应用领域 | 生物生产 |
细胞类型 | 悬浮液CHO,HEK-293及其衍生物 |
转染数 | 1毫升FectoPRO的®足以转染800毫升到1升以上的细胞培养的 |
存储 | 5°C±3°C,适当存放可稳定1-2年 |
提供 | FectoPRO ®助推器 |
使用瞬时转染和基因表达获得的蛋白质产量。
FectoPRO®转染试剂盒专门设计用于使用低DNA量(<1 µg / ml细胞培养物)在各种无血清培养基中的CHO和HEK-293悬浮细胞中增强瞬时基因表达(TGE)。
FectoPRO®介导的转染过程可轻松扩展至几毫升到几升的细胞培养,确保强大的可重复生产蛋白质。更高的生产率和对DNA的低要求使FectoPRO®成为生物生产过程中具有成本效益的解决方案。
订购信息:
Product | Reference Number | Transfection Reagent | Expression Booster | Expression Medium |
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FectoPRO® Reagent | 116-001 | 1 ml | 1 ml | - |
FectoPRO® Reagent | 116-010 | 10 ml | 10 ml | - |
FectoPRO® Reagent | 116-040 | 4 x 10 ml | 4 x 10 ml | - |
FectoCHO® CD Medium | 716-01L | - | - | 1 L |
FectoCHO® CD Medium | 716-06L | - | - | 6 x 1 L |
FectoCHO® Expression System | 716-01LKIT | 1 ml | 1 ml | 1 L |
FectoCHO® Expression System | 716-06LKIT | 5 x 1 mL | 5 x 1 mL | 6 x 1 L |
FectoPRO ®使惊人的高蛋白质和抗体的产率在两个CHO和HEK-293细胞在无血清培养基中悬浮培养的(图1)。
图1 FectoPRO ®给出了在悬浮的CHO细胞惊人抗体生产产量。将细胞以1×106细胞/ ml的30ml的FreeStyle™CHO表达培养基中接种,并用FectoPRO染®(0.8微克DNA / ml)或的FreeStyle™MAX试剂(1.25微克DNA / ml)的下列推荐的方案针对各个试剂。重组小鼠IgG产率,使用蛋白G的生物传感器(福特生物转染后1〜6天测定®八位字节RED96系统)。FreeStyle™是Life Technologies™Corporation的商标。数据由ProteoGenix SAS(法国)友善提供。
了解我们的套件致力于CHO细胞:FECTOCHO ®表达系统
FectoPRO ®很大程度上优于其它转染试剂如线性PEI在生物生产过程中常用的转染效率(图2)而言,导致优异的蛋白质生产产率(图3)。
图2 FectoPRO ®给出了在悬浮的CHO细胞转染效率高。的FreeStyle™CHO-S细胞以1×10接种6个细胞/ ml的30ml的FreeStyle™CHO表达培养基中,并用FectoPRO转染® + FectoPRO ®使用0.4微克/毫升和1.25微克/毫升的助推器或的FreeStyle™MAX试剂表达GFP的质粒。转染24小时后,使用荧光显微术测定GFP表达。
图3 FectoPRO ®给出在悬浮液中的CHO和HEK-293细胞优于蛋白质生产的产率。的FreeStyle™CHO-S和HEK-293F细胞以1×10接种6个细胞/ ml的30ml的FreeStyle™CHO或293表达培养基并用FectoPRO转染® + FectoPRO ®助推器(0.4微克DNA /毫升),自由式™ MAX试剂(1.25微克DNA / ml)或PEIpro ®(1个微克DNA /毫升)以下推荐的协议用于相应的试剂。在转染后72小时(CHO细胞)和120小时(HEK-293细胞),通过蛋白G亲和定量(HPLC)和Western Blot测定IgG3-Fc(34kDa)的产生。标准对应于纯化的IgG3-Fc(34 kDa)。
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高质量质粒DNA的制备可能非常昂贵,尤其是在大量DNA大量生产大量蛋白质需要大量质粒的情况下。FectoPRO ®节省40〜60%的DNA成本通过使用0.4至0.6微克DNA / 10 6个细胞/ ml的细胞培养物; 因此,使该套件成为生物生产过程中可承受且经济的解决方案。
表1 DNA的量和试剂(FectoPRO的体积®和竞争对手)根据生产商的建议转染。
蛋白质生产过程的持续时间在过去几年中有所增加,现在大多数蛋白质生产过程会持续1-2周,以获得宜量的蛋白质生产。FectoPRO ®已经发展到保证持续生产蛋白质在几天内,同时保持较高的细胞活力,可以长期保存蛋白生产(图4)。
图4 FectoPRO ®给出了在悬浮细胞持续蛋白质生产。的FreeStyle™HEK-293F细胞以1×10 6个细胞/ ml的30毫升的FreeStyle™293表达培养基的接种,并用FectoPRO转染® + FectoPRO ®按照标准方案助推器(0.5微克DNA /毫升)中。在不同的时间点后,通过蛋白G亲和定量(HPLC)测定IgG3-Fc的产生。FreeStyle™CHO-S可获得类似的结果(数据未显示)。
强大的协议可轻松适应各种培养皿,从而简化您的生物生产过程。FectoPRO ®介导的转染,可以线性地从30毫升放大到升细胞培养物的无协议适配(图5)。
图5 FectoPRO ®是在CHO细胞中易于扩展和重现的。的FreeStyle™CHO-S细胞以1×10接种6个细胞/ ml在30毫升100毫升300毫升或1升的FreeStyle™CHO表达培养基中,并用FectoPRO转染® + FectoPRO ®助推器(0.5微克DNA / ml)的。在第1至6天,使用台盼蓝排除法(A)测定细胞活力,并通过蛋白G亲和定量(HPLC)(B)和Western Blot(C)测定IgG3-Fc的产生。标准品(C)对应于纯化的IgG3-Fc(34 kDa)。
FectoPRO ®制造和使用配制高度控制生产过程。这样可确保实验之间的结果均具有高度可重复性。此外,为了满足当前的管理指南,FectoPRO ®使用释放先进的质量控制包括用于蛋白质生产率的规范,保证优良批与批之间的一致性(图6)。
图6. FectoPRO ®提供优异的批与批的重现。悬浮CHO细胞以1×10接种6个细胞/ ml在30ml CHO培养基中,并使用3个不同批次FectoPRO的转染®(CCIII 078,CCIII 104或CCIII 106)按照标准方案。转染72小时后,通过蛋白G亲和力定量测定IgG3-Fc的产生。在悬浮的HEK-293细胞上获得了相似的结果(数据未显示)。
不像其它可商购的试剂,FectoPRO ®转染试剂盒是适合于CHO和HEK-293细胞(图2和3)。该试剂与各种培养基配方兼容; 因此,实验室的实施非常简单明了(图7,表2)。
图7 FectoPRO ®给出了在不同培养基中生长的悬浮的CHO细胞优于蛋白质生产的产率。CHO细胞以1×10接种6个细胞/ ml的30ml的FreeStyle™CHO表达培养基中,CD CHO培养基或Pro-CHO™4培养基并用FectoPRO转染® + FectoPRO ®助推器或的FreeStyle™MAX试剂以下对推荐的方案各自的试剂。转染72小时后,通过蛋白G亲和定量(HPLC)测定IgG3-Fc的产生。
使用FectoPRO表2蛋白质产量®在不同培养基中的CHO细胞。
使用FectoPRO表3.蛋白质产量®在不同培养基中于HEK-293细胞。
发现我们的套件致力于CHO细胞:FECTOCHO ®表达系统
自由式TM,CD FortiCHO TM,CD的OptiCHO TM,Expi293 TM,ExpiCHO TM和CD293是Gibco公司的商标®。
Pro-CHO TM,PowerCHO TM和Pro293 TM是Lonza TM Group的商标。
HyClone TM,HyCell TM和TransFx TM是GE Healthcare TM的商标。
BalanCD ®和Transfectory TM是Irvine Scientific公司的商标TM。
FectoPRO ®也非常适合病毒生产。