biolegend 640952说明书

Biolegend公司的试剂主要包括细胞免疫、细胞因子、趋化因子、粘附因子等与癌症研究、T调节细胞研究、干细胞研究、先天免疫研究、细胞周期分析、凋亡研究及特定修饰类抗体等领域相关的试剂，用于流式、ELISA、免疫沉淀、WB、免疫荧光、免疫组化及体内体外功能学试验。其中，Biolegend公司的流式抗体以其具有较宽范围的荧光选择及较高的性价比，为广大科研工作者所接受！同时，公司配备了一支经验丰富的技术服务队伍，为客户提供的配色方案及快速的售后处理服务！

biolegend 640952说明书

APC / Fire™750 Annexin V.

其他名称   Annexin A5

描述

膜联蛋白V（或膜联蛋白A5）是细胞内蛋白质的膜联蛋白家族的成员，其以钙依赖性方式结合磷脂酰丝氨酸（PS）。PS通常仅在健康细胞中的质膜细胞内小叶上发现，但在早期细胞凋亡期间，膜不对称性丧失并且PS易位至外部小叶。然后荧光染料标记的膜联蛋白V可用于特异性靶向和鉴定凋亡细胞。Annexin V结合缓冲液（目录号422201）推荐用于膜联蛋白V染色。单独的膜联蛋白V结合不能区分凋亡细胞和坏死细胞。因此，我们建议使用我们的Helix NP™Blue（目录号425305），Helix NP™Green（目录号425303）或Helix NP™NIR（目录号425301）。早期凋亡细胞将排除7-AAD和PI，

人T白血病细胞系Jurkat，用BioLegend的抗人CD95（EOS9.1）mAb（cat.305704）在37℃处理（左）或未处理（右）4小时，然后用膜联蛋白V-APC染色/ Fire TM 750和Helix NP Green（cat.425303,1.25nM）在37℃下在膜联蛋白结合缓冲液中15分钟。 

产品详情：

反应

所有哺乳动物物种

公式

磷酸盐缓冲溶液，pH 7.2，含有0.09％Sodium azide和0.2％（w / v）BSA（来自美国）。

制备

通过亲和层析纯化抗体，并在适宜条件下与APC / Fire TM 750缀合。该溶液不含未缀合的APC / Fire TM 750和未缀合的抗体。

浓度

批次特定（请联系技术支持以获得浓度和总μg量，或者如果您有批号，请使用我们的查找工具。）

存储和处理

抗体溶液应在2°C至8°C之间进行稀释，并避免长时间暴露在光线下。不要冻结。

应用

FC - 质量测试

推荐用法

通过流式细胞术分析的免疫荧光染色对该产品的每批产品进行质量控制测试。对于流式细胞术应用，建议在100μl体积的膜联蛋白V结合缓冲液（目录号422201）中使用该试剂为每100,000,000,000个细胞5-15μg。建议滴定试剂以获得每种应用的良性能。

* APC / Fire™750的大激发波长为650 nm，大发射波长为787 nm。

激发激光

红色激光（633 nm）

应用笔记

膜联蛋白V染色 
1.用冷BioLegend细胞染色缓冲液（目录号420201）洗涤细胞两次，然后以1×10 ⁶  细胞/ ml 的浓度将细胞重悬于膜联蛋白V结合缓冲液（目录号422201）中。
2.将100μl细胞悬浮液转移到5ml试管中。
3.加入5μlAPC/ Fire TM 750膜联蛋白V. 
4.加入10μlPI溶液（目录号421301）或7-AAD（目录号420403/420404）。 
5.轻轻涡旋细胞，在室温（25°C），黑暗中孵育15分钟。 
6.向每个管中加入400μl膜联蛋白V结合缓冲液（目录号422201）。通过流式细胞术分析。

申请参考

（PubMed链接表示BioLegend引文）

1. Koopman G，et al。1994年血液 84：1415。
2. Vermes I，et al。1995. J. Immunol。方法 184：39。
3. Dachary-Prigent J，et al。1993. Blood 81：2554。
4. Sekine C，et al。2009. Int Immunol。
5. Grujic M，et al。2010. J. Immunol。185：1730

抗原详细信息

生物学领域

细胞凋亡/肿瘤抑制因子/细胞死亡，细胞生物学，神经科学

相关常见问题

我可以冻结膜联蛋白V结合物吗？

它不应该被冻结，因为它会导致由于二聚化而丧失生物活性。

膜联蛋白V染色期间可以使用RPMI吗？

遵循产品数据表中所述的协议。此外，RPMI 1640具有相对高浓度的磷酸盐和低钙离子浓度，这对膜联蛋白与其目标磷脂酰丝氨酸（PS）的结合产生负面影响。使用膜联蛋白V测量细胞死亡也可能受到冰上孵育时间，钙浓度和培养基类型的显着影响。

pH和染色温度如何影响膜联蛋白V-磷脂酰丝氨酸的结合？

膜联蛋白 - 磷脂酰丝氨酸结合在pH 5.2以下并且在42℃的温度下延长孵育时丢失。

您的Annexin是如何制作的以及它涵盖的序列是什么？

它在大肠杆菌中制备，覆盖人aa Met1-Asp320。

Annexin V是否适合与CytoF®的Maxpar®试剂盒结合使用？

Maxpar®标记试剂盒需要部分还原蛋白质，因此可以通过还原抗体铰链区的SH基团引入金属螯合物。人膜​​联蛋白V仅含有一个半胱氨酸，据报道它是化学惰性的。因此，Maxpar®标签协议不会与膜联蛋白V工作，除非一个自由的-SH基团可以引入到膜联蛋白V.有关膜联蛋白V请咨询发表论文像这样的SH-介导的共轭更多信息一个。

为什么我需要使用Annexin V Binding Buffer？

膜联蛋白V结合需要溶液中存在钙。因此，我们提供Annexin V结合缓冲液（目录号422201），它针对膜联蛋白V染色的良性能进行了优化。