Taq-Klenow聚合酶

Molecular Cloning Laboratories（MCLAB）成立于1998年，是为生命科学界提供基因组研究耗材和服务的先进者。

MCLAB提供具有成本效益的消耗品和试剂，专注于代以及新一代测序和DNA段分析。我们提供大量分子生物学相关产品，包括抗体，生化试剂，克隆试剂盒，酶，PCR试剂盒，蛋白质凝胶和溶液等。作为我们自己的制造商，我们可以控制生产流程，并大限度地减少定制和大规模订单的延迟。它有助于确保我们的客户获得高质量和价值。

MCLAB拥有一支由20 多位经验丰富的科学家组成的团队，致力于为研究人员提供的服务。我们专注于基因组学领域，拥有DNA测序，发酵，片段分析，分子克隆，过表达，蛋白质纯化和蛋白质合成方面的专家。我们采用量身定制的客户服务方式，让您有机会定制您的项目，并直接与我们的科学家团队交流以获得技术支持。凭借二十多年的经验，我们才华横溢，技术的员工致力于为您提供所需的成果。

Taq-Klenow聚合酶

Taq- Klenow 通过截短其N-末端从全长Taq DNA聚合酶修饰，分子量为61kDa。

描述：
Taq -Klenow 通过截短其N-末端从全长Taq- Klenow 修饰，分子量为61kDa。与常规Taq- Klenow 相比，这种截短形式缺乏5' - > 3'外切核酸酶活性，但更具热稳定性，并且在PCR扩增中具有更高的保真度。

应用：
- PCR（普通和高通量）
- 引物延伸
- 微阵列分析
- 变性液相色谱（DHPLC）

来源：携带来自嗜热生物Thermus Aquaticus YT-1 的Taq- Klenow基因的
重组大肠杆菌菌株。

供应：
10x Taq PCR Buffer（无dNTP）

提供：
20 mM Tris-HCl 
100 mM NaCl 
1.0 mM DTT 
0.1 mM EDTA 
稳定剂
50％甘油
pH 7.5 @ 25°C 

单位定义：
1单位定义为酶量将在75℃下在30分钟内将10nmol的dNTP掺入酸不溶性材料中。

PCR指南：
Taq -Klenow是初和常用的PCR酶。Taq酶擅长于从低复杂性模板来源扩增较短（<5kb）的序列，并且在很少或没有优化反应条件的情况下产生稳健的产率。在使用Taq DSC 2.0 DNA聚合酶设计PCR策略时，请考虑以下指南。

1. DNA模板：尽管通常不需要对PCR模板进行大量纯化，但应注意粗制或部分纯化的DNA来源，因为处理和化学试剂会对PCR过程产生不利影响。应避免接触短波紫外线或其他DNA损伤剂，高离子强度，SDS，加载染料和苯酚等清洁剂也应避免接触。为了防止以前的PCR反应造成污染，请考虑在正压罩和气溶胶屏障吸管设置反应。在典型的25个循环PCR中，104个拷贝的靶序列将产生可重复的扩增产物。这相当于大约0.1-1ng / ml（终浓度）的质粒DNA和1-10μg/ ml的基因组DNA。使用较低的DNA浓度通常会产生较少的非特异性产物，

2.引物设计：理想地，寡核苷酸引物长度为15-30个碱基，接近50％G + C，并具有相等的（+/- 3℃）退火温度。建议使用软件来检测自身互补或发夹易发区域，并由一些综合提供商提供服务。注意，虽然引物的5'末端可能包含未模板序列，但3'末端必须*匹配。反应中典型的寡核苷酸浓度为0.1-0.5μM。

3.镁：镁是PCR反应的关键组成部分，尽管其浓度可以调节以促进各种效应。通常，1.5-2.0mM Mg ²⁺靶向，但更高的浓度（高达5mM）可用于以保真度为代价刺激反应的产率。相反的情况也是如此 - 较低的镁浓度将促进更高保真度的产品，总体扩增产率更低。注意，某些反应组分，特别是模板DNA和寡核苷酸，可能为反应提供螯合剂，这会降低有效的镁浓度并使反应饿死。

4. dNTP：通常，使用100-200μMdNTP的终浓度，尽管更高的浓度可以刺激产量（特别是对于更长的靶标）并且更低的可以提供保真度的增加。Taq酶DSC 2.0 DNA聚合酶还可以掺入和读取脱氧尿苷和肌苷，这两种类似物在某些应用中使用。

5. Taq DSC 2.0聚合酶：典型的是1单位/50μL反应（20U / mL），但可以添加额外的酶以刺激产率。Taq DSC 2.0 DNA聚合酶以大约1-2000个核苷酸/分钟扩展DNA模板，因此建议每个循环每个kb应提供30-60秒的延伸时间。适当的延伸温度范围为68-72°C。因为Taq DSC 2.0 DNA聚合酶利用DNA聚合酶对双链DNA段的天然亲和力来促进其热启动功能，所以它不需要广泛的初始变性步骤来激活聚合酶。

典型的50μl反应：
在冰上，准备以下每种主混合物，合并，并置于加热（至94°C）热循环仪中：

2x DNA /寡核苷酸主混合物：
1.0μl10mM 
dNTPs1.0μl10μMFrontPrimer 
1.0微升10μM反向引物
1.0微升500纳克/微升基因组DNA 
21微升I型水

2X酶/缓冲液预混：
5.0微升10X 的Taq PCR缓冲液（无的dNTP）
0.2微升5单位/微升的Taq DSC 2.0 DNA聚合酶
19.8微升I型水

推荐储存条件： -20°C

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